LMTK3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403191-ACT

Die humane Lemur-Tyrosinkinase 3 (LMTK3) kodiert eine membranassoziierte Ser/Thr-Kinase, die an der Regulation des Rezeptortransports und der Signaltransduktion beteiligt ist, einschließlich der Modulation von Signalwegen für Wachstumsfaktor- und Hormonrezeptoren. LMTK3 beeinflusst die zelluläre Proliferation, das Überleben und Transkriptionsprogramme durch eine kinaseabhängige Kontrolle der endosomalen Sortierung und nachgeschalteter Signalnetzwerke. Eine dysregulierte LMTK3-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Hinblick auf ihre Rolle in onkogenen Signalwegen, der endokrinen Ansprechbarkeit und Mechanismen der Therapieresistenz untersucht. Daher ist LMTK3 ein nützliches Ziel, um in humanen Zellmodellen das kinasegetriebene Crosstalk von Signalwegen, den Rezeptorumsatz und die kontextabhängige Transkriptionsregulation zu analysieren.

LMTK3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LMTK3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LMTK3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LMTK3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LMTK3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LMTK3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LMTK3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LMTK3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LMTK3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LMTK3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.