Plasmide CRISPR d'Activation (h) LIX1: sc-406006-ACT

LIX1 humain (limb expression 1) code une protéine conservée impliquée dans les programmes de mise en place des patrons du développement et dans le contrôle, dépendant du contexte, de la différenciation cellulaire. Bien que son mécanisme moléculaire reste imparfaitement défini, l’expression de LIX1 est corrélée à des états mésenchymateux et de type progéniteur, et a été associée à des réseaux transcriptionnels qui orientent la spécification des lignages et la morphogenèse tissulaire. Des niveaux anormaux de LIX1 ont été rapportés dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment dans des cancers où des altérations de la différenciation, de la migration et des interactions avec le stroma contribuent à la progression. Ainsi, LIX1 est fréquemment étudié comme un nœud de régulation reliant les programmes d’expression génique du développement à la plasticité des états cellulaires.

LIX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LIX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LIX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LIX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LIX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LIX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LIX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LIX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LIX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LIX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.