Particules Lentivirales d'Activation (h) LIMP II: sc-402532-LAC

SCARB2 code la protéine membranaire intégrale lysosomale 2 (LIMP II), une glycoprotéine transmembranaire à passages multiples, enrichie dans les endosomes tardifs et les lysosomes, qui soutient le trafic endolysosomal et l’homéostasie des lysosomes. LIMP II agit comme un récepteur clé pour l’acheminement de la β‑glucocérébrosidase (GCase) vers les lysosomes, reliant la fonction de SCARB2 au métabolisme des sphingolipides et à la protéostasie au sein de la voie autophagie–lysosome. Par ses rôles dans l’organisation membranaire et le transport de cargos, SCARB2 influence des processus tels que l’endocytose, le tri des enzymes lysosomales et la dégradation des macromolécules. Une activité altérée de SCARB2/LIMP II a été associée à des phénotypes de surcharge lysosomale et à un stress cellulaire lié à la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la dysfonction lysosomale et du catabolisme lipidique.

Les particules d'activation lentivirales LIMP II (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SCARB2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LIMP II (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SCARB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LIMP II. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SCARB2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.