Limd1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424343

Übersicht

LIM-Domäne enthaltendes Protein 1 (Limd1) ist ein Gerüstprotein, das an fokalen Adhäsionen sowie Zell-Zell-Kontakten lokalisiert und Protein-Protein-Interaktionen koordiniert, die die Organisation des Zytoskeletts und die Mechanotransduktion prägen. Limd1 ist an Signalwegen beteiligt, die Zelladhäsion, Migration und Wachstumskontrolle steuern, und wurde mit der Regulation der Hippo/YAP-Signalkaskade in Verbindung gebracht – über Interaktionen, die die LATS-Aktivität und die Lokalisation von YAP/TAZ beeinflussen. In Mausmodellen unterstützt Limd1 Untersuchungen zur Gewebehomöostase und zu Entwicklungsprogrammen, in denen adhäsionsabhängige Signalgebung entscheidend ist. Eine Fehlregulation von LIMD1-assoziierten Netzwerken ist für die Tumorsuppressor-Biologie und metastasenassoziierte Phänotypen relevant, einschließlich veränderter Invasion und EMT-ähnlicher Prozesse (epithelial-mesenchymale Transition).

Das Limd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Limd1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Limd1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Limd1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Limd1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Limd1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Limd1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Limd1-Exone abzielen, die für die Limd1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Limd1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Limd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Limd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Limd1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Limd1 HDR-Plasmid (m) und Limd1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Limd1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Limd1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.