LGR5 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420320-LAC

Das murine **Lgr5**-Gen kodiert **LGR5**, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor mit leucinreichen Wiederholungen, der vor allem als Marker und funktioneller Regulator adulter Stammzellpopulationen in mehreren epithelialen Geweben bekannt ist. LGR5 verstärkt die kanonische Wnt/β‑Catenin‑Signalübertragung durch hochaffine Bindung an R‑Spondin‑Liganden, stabilisiert Frizzled/LRP‑Rezeptorkomplexe und amplifiziert Transkriptionsprogramme, die Selbsterneuerung, Proliferation und Linienfestlegung steuern. Lgr5‑exprimierende Zellen tragen zur Gewebehomöostase und Regeneration bei, und eine veränderte Aktivität der LGR5/Wnt‑Achse wird in Zusammenhängen gestörter Stammzell‑Eigenschaften, epithelialen Umbaus und der Tumorbiologie intensiv untersucht. Daher dient Lgr5 als gut zugänglicher Ansatzpunkt, um Stammzelldynamik, Nischensignale und Wnt‑getriebene Transkriptionsnetzwerke in Mausmodellen zu erforschen.

LGR5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Lgr5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LGR5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Lgr5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LGR5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Lgr5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.