Plasmide CRISPR d'Activation (h) leupaxin: sc-405101-ACT

LPXN code la leupaxine, une protéine adaptatrice de la famille de la paxilline, enrichie au niveau des adhérences focales, où elle coordonne la signalisation dépendante des intégrines avec le remodelage du cytosquelette d’actine. Grâce à ses interactions avec des kinases et des protéines d’échafaudage, la leupaxine contribue à l’adhésion cellulaire, à la migration et aux processus de mécano‑transduction qui façonnent la détection de la matrice extracellulaire et les programmes transcriptionnels en aval. L’activité de LPXN s’inscrit au carrefour des voies des adhérences focales et de celles liées aux GTPases Rho, qui régulent la motilité cellulaire et le comportement invasif. Une expression ou une signalisation impliquant la leupaxine dérégulées a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux ainsi que dans des états fonctionnels de cellules immunitaires, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études des phénotypes associés aux métastases et de la signalisation pilotée par l’adhérence.

leupaxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LPXN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

leupaxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LPXN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LPXN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de leupaxin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LPXN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de leupaxin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie leupaxin dans les cellules tumorales présentant une expression de LPXN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.