Plásmido Doble Nickase (h) LCAT: sc-405225-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LCAT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LCAT (h) y el plásmido de doble nickasa LCAT (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LCAT. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LCAT Anticuerpo (D-2): sc-376682
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LCAT | sc-405225-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LCAT | sc-405225-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La LCAT humana (lecitina–colesterol aciltransferasa) es una enzima secretada que cataliza la esterificación del colesterol libre en la superficie de las lipoproteínas, generando ésteres de colesterol que favorecen la maduración de las HDL y el transporte inverso de colesterol. Al remodelar fosfolípidos y regular la composición de las partículas lipoproteicas, la LCAT influye en vías de homeostasis lipídica vinculadas al eflujo de colesterol, la función de las apolipoproteínas y el tráfico lipídico sistémico. Las alteraciones en la actividad de la LCAT se asocian con fenotipos de dislipidemia y perfiles lipoproteicos anómalos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la biología del riesgo cardiometabólico. En sistemas experimentales, la perturbación de LCAT se utiliza para analizar las relaciones entre la biogénesis de HDL, el manejo del colesterol por macrófagos y la señalización inflamatoria impulsada por lípidos.
LCAT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LCAT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LCAT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LCAT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LCAT alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.