LAT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401281

Descripción general

El enlazador para la activación de células T (LAT) es una proteína adaptadora transmembrana que se fosforila en tirosinas tras la activación del receptor de células T (TCR) y actúa como andamiaje para ensamblar complejos de señalización multiproteicos. LAT coordina el reclutamiento de GRB2, GADS, PLCγ1 y SOS para propagar la señalización a través del flujo de calcio y de las vías Ras–MAPK/ERK y NFAT/NF-κB, modulando la activación de las células T, la producción de citocinas y la organización de la sinapsis inmunológica. En células humanas, la integración alterada de señales dependiente de LAT es relevante para el estudio de la desregulación inmunitaria, incluidos mecanismos que contribuyen a la autoinmunidad, fenotipos tipo inmunodeficiencia y programas aberrantes de activación de linfocitos. Dado que LAT se sitúa en un nodo crítico de la señalización proximal del TCR, se utiliza ampliamente como herramienta para diseccionar el cableado de las vías, el control por retroalimentación y la codificación de amplitud y duración de la señal en la inmunidad adaptativa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LAT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LAT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LAT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LAT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LAT para la investigación de la señalización de LAT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LAT críticos para la función de LAT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LAT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LAT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LAT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LAT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LAT (h) y el plásmido HDR LAT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LAT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LAT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.