LASP-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404630-LAC

LASP1 codifica la proteina 1 contenente domini LIM e SH3 (LASP-1), un adattatore di adesione focale legante l’actina che si localizza in lamellipodi, fibre di stress e giunzioni cellula–cellula per coordinare il rimodellamento del citoscheletro. LASP-1 mette in comunicazione la segnalazione nei complessi di adesione con la dinamica dell’actina, influenzando processi quali la migrazione cellulare, la formazione di protrusioni di membrana e la meccanotrasduzione. Attraverso interazioni con proteine tra cui zyxin, VASP e componenti della segnalazione delle adesioni focali, LASP-1 è collegata a vie che regolano il turnover dell’adesione e la motilità. Un’espressione deregolata di LASP1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata per il suo ruolo nell’invasione, in fenotipi associati alla metastasi e in programmi trascrizionali dipendenti dal citoscheletro.

Le particelle di attivazione lentivirale LASP-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di LASP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LASP-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione LASP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LASP-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo LASP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.