LAMP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400120

Descripción general

LAMP1 (proteína 1 de membrana asociada a lisosomas) es una importante glucoproteína transmembrana de tipo I de los endosomas tardíos y los lisosomas que ayuda a mantener la integridad lisosomal y participa en el tráfico vesicular, la fusión endosoma–lisosoma y el flujo de autofagia hacia los lisosomas. Al contribuir al posicionamiento de los lisosomas, la protección de la membrana y la capacidad degradativa, LAMP1 influye en el procesamiento de antígenos, el recambio de proteínas de membrana y las respuestas celulares al estrés por falta de nutrientes. La alteración en la abundancia o la localización de LAMP1 se utiliza con frecuencia como un indicador de la biogénesis lisosomal y de las respuestas al estrés, y se asocia con vías relevantes para la neurodegeneración, la infección y la adaptación de células cancerosas. LAMP1 también se emplea habitualmente como marcador lisosomal en estudios de dinámica de orgánulos y redes de señalización relacionadas con los lisosomas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LAMP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LAMP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LAMP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LAMP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LAMP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LAMP1 para la investigación de la señalización de LAMP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LAMP1 críticos para la función de LAMP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LAMP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LAMP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LAMP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LAMP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LAMP1 (h) y el plásmido HDR LAMP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LAMP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LAMP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.