Plasmide CRISPR d'Activation (h) LAMP1: sc-400120-ACT

La glycoprotéine 1 associée à la membrane lysosomale (LAMP1) est une protéine transmembranaire de type I, très abondante, de la membrane limitante du lysosome, qui contribue à maintenir l’intégrité des lysosomes et soutient la dynamique de fusion des vésicules. Elle participe au trafic endo-lysosomal, à la lysophagie et au flux autophagique, influençant la dégradation des cargaisons et les voies de recyclage qui s’entrecroisent avec la signalisation mTOR et les réponses au stress. Le positionnement des lysosomes et la stabilité membranaire médiés par LAMP1 modulent également l’exocytose et le traitement des antigènes dans les cellules immunitaires, reliant la biologie lysosomale à la signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de LAMP1 et un dysfonctionnement lysosomal sont associés à la neurodégénérescence, aux interactions hôte–pathogène liées aux infections et à l’adaptation des cellules cancéreuses au stress métabolique, ce qui en fait un nœud pertinent pour des analyses au niveau des voies.

LAMP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LAMP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LAMP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LAMP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LAMP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.