Laminin γ-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401029-ACT

LAMC1 codifica a laminina γ1, uma cadeia essencial de glicoproteína da matriz extracelular que se monta com subunidades α e β para formar múltiplas isoformas de laminina nas membranas basais. A laminina γ1 sustenta a adesão celular, a polaridade e a migração ao interagir com integrinas e outros recetores, coordenando sinais que influenciam a organização do citoesqueleto e programas de sobrevivência e diferenciação. Por meio do seu papel na integridade da membrana basal, a LAMC1 contribui para a morfogénese tecidular e para interações epitélio–mesênquima, processos frequentemente remodelados na fibrose, na invasão tumoral e na disfunção vascular. Redes de laminina desreguladas e alterações na expressão de LAMC1 têm sido associadas a deposição anómala de matriz extracelular e a mudanças na sinalização célula–matriz observadas em diversas doenças humanas.

Laminin γ-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin γ-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin γ-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin γ-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin γ-1 em células tumorais com expressão de LAMC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.