Plásmido Doble Nickase (h) Laminin α-4: sc-401801-NIC

LAMA4 codifica la laminina α-4, una subunidad clave de la matriz extracelular que se ensambla en heterotrímeros de laminina dentro de las membranas basales y modula la adhesión y la señalización célula–matriz. La laminina α-4 favorece las interacciones entre endotelio y músculo liso, contribuye a la organización de la membrana basal vascular e influye en la migración, la polaridad y la supervivencia a través de vías asociadas a integrinas y distroglicano que convergen con la señalización de las adhesiones focales. La alteración de la expresión de LAMA4 o de la composición de la membrana basal se ha vinculado con angiogénesis, inflamación y remodelado desregulados en patologías cardiometabólicas y vasculares, y también se observa en el microambiente tumoral y en procesos estromales. Como componente de la matriz, la laminina α-4 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar cómo las señales extracelulares regulan la arquitectura tisular y la función de barrera.

Laminin α-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.