Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Lamin B1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400032-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Lamin B1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Lamin B1ダブルニカースプラスミド（h）およびLamin B1ダブルニカースプラスミド（h2）は、LMNB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Lamin B1 抗体 (A-11): sc-377000
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Lamin B1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400032-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lamin B1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400032-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMNB1 はラミンB1をコードしており、ラミンB1は核ラミナの中核をなす構成要素です。核内膜の内側直下で重合し、核形状、クロマチンの配置、ならびにメカノトランスダクション（力学刺激の情報伝達）を維持します。ラミンB1は有糸分裂時の核膜崩壊と再構築に関与し、DNA複製と修復を制御するとともに、核周辺部でヘテロクロマチンを配置するラミナ関連ドメイン（LAD）を介して転写にも影響します。ラミンB1の発現量や構造の変化は、ミエリン形成の異常や神経変性様の表現型と関連づけられており、より広い意味ではゲノム安定性、細胞周期進行、核構築を司る経路とも関係します。シグナル伝達およびクロマチン相互作用の足場として、ラミンB1は細胞老化、分化、ストレス応答の文脈でしばしば研究されています。
Lamin B1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LMNB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LMNB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LMNB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LMNB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。