L-type Ca⁺⁺ CP γ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419413

Übersicht

Cacng1 kodiert die γ1-Hilfsuntereinheit des L‑Typ‑Ca++‑Kanals, ein tetraspanes Membranprotein, das biophysikalische Eigenschaften und die Membranexpression spannungsabhängiger Calciumkanalkomplexe in erregbaren Geweben moduliert. Durch die Feinabstimmung des Ca++‑Einstroms beeinflusst es die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, aktivitätsabhängige Signalübertragung und nachgeschaltete Ca++‑regulierte Signalwege, die die Muskelphysiologie und die zelluläre Erregbarkeit prägen. Eine veränderte Regulation von Komponenten des L‑Typ‑Ca++‑Kanals wird mit Störungen der Calciumhomöostase in Verbindung gebracht, die mit neuromuskulären und kardialen Funktionsphänotypen einhergehen, weshalb Cacng1 ein nützlicher Lokus zur Untersuchung der Biologie von Kanal‑Hilfsuntereinheiten in Mausmodellen ist. Funktionelle Studien untersuchen häufig, wie γ‑Untereinheiten das Kanal‑Gating, den Transport (Trafficking) und die Kopplung an Ca++‑abhängige transkriptionelle Antworten beeinflussen.

Das L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cacng1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cacng1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cacng1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP γ1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cacng1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP γ1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cacng1-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP γ1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cacng1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cacng1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP γ1 HDR-Plasmid (m) und L-type Ca++ CP γ1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cacng1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cacng1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.