Plásmido Doble Nickase (h) KV4.3: sc-404247-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)KV4.3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa KV4.3 (h) y el plásmido de doble nickasa KV4.3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KCND3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) KV4.3 | sc-404247-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) KV4.3 | sc-404247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano KCND3 codifica la subunidad del canal de potasio dependiente de voltaje KV4.3, un mediador principal de las corrientes de K+ tipo A de inactivación rápida, que moldean la repolarización del potencial de acción y regulan la frecuencia de disparo en células excitables. La actividad de KV4.3 se integra con programas de excitabilidad de membrana que acoplan la conductancia iónica a la señalización de Ca2+, la transmisión sináptica y la expresión génica dependiente de la actividad. En el sistema nervioso, KCND3 contribuye al marcapasos neuronal y al procesamiento de señales dendríticas, y se han vinculado variantes con trastornos de la excitabilidad, incluida la ataxia espinocerebelosa y fenotipos de arritmia cardíaca. Estas características hacen de KCND3 una diana útil para estudiar mecanismos de señalización eléctrica, biofísica de canales y relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares relevantes para la enfermedad.
KV4.3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCND3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCND3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCND3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCND3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.