Plásmido CRISPR de Activación (h) Ksr-2: sc-402872-ACT

El KSR2 humano (Ksr-2) codifica una proteína andamiaje que coordina la señalización MAPK/ERK al organizar las interacciones del módulo RAF–MEK–ERK, modulando la amplitud y la duración de la señal aguas abajo de los receptores de factores de crecimiento. KSR2 también se vincula con la homeostasis energética celular al modular redes de señalización de quinasas que convergen en la regulación metabólica, conectando señales mitogénicas con procesos sensibles a los nutrientes. A través de estas conexiones entre vías, la actividad alterada de KSR2 se ha asociado con una señalización desregulada en contextos que implican el control del crecimiento, la diferenciación y el metabolismo sistémico. En consecuencia, KSR2 se estudia con frecuencia en modelos de integración de señales relevantes para fenotipos relacionados con la obesidad, la sensibilidad a la insulina y la regulación neuroendocrina.

Ksr-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KSR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ksr-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KSR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KSR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ksr-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KSR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ksr-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ksr-2 en células tumorales con expresión de KSR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.