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KRAS慢病毒激活颗粒(h) | sc-416674-LAC | 200 µl | $455.00 |
KRAS 编码一种小型 GTP 酶,作为分子开关在 GDP 结合态与 GTP 结合态之间循环转换,将来自已激活受体酪氨酸激酶的信号传递至下游效应分子。通过 RAF–MEK–ERK(MAPK)与 PI3K–AKT–mTOR 通路,KRAS 调控细胞增殖、生存、分化及细胞骨架动态,并在 RAL-GEF 信号传导与代谢重编程中发挥额外作用。KRAS 信号失调与多种癌症类型中的致癌转化、反馈调控改变以及肿瘤微环境相互作用变化密切相关。作为关键的信号枢纽,KRAS 常用于在人类细胞模型中研究通路串扰、耐药机制以及基因型到表型的映射关系。
KRAS 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 KRAS 表达。
KRAS 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在KRAS转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性KRAS表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 KRAS 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。