KLF6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400888-ACT

KLF6 (Krüppel-like factor 6) è un fattore di trascrizione umano a dita di zinco che regola programmi genici coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, nella differenziazione e nelle risposte allo stress cellulare. Modula reti trascrizionali associate alla segnalazione TGF-β e a vie dipendenti da MAPK, influenzando l’espressione di bersagli implicati nella limitazione della crescita e nel rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività di KLF6 contribuisce al mantenimento dell’omeostasi tissutale ed è spesso coinvolta in stati trascrizionali deregolati osservati nella biologia dei tumori e nei processi fibrotici. In quanto regolatore dipendente dal contesto, KLF6 rappresenta un nodo utile per analizzare i circuiti trascrizionali e le relazioni tra genotipo e fenotipo in diversi modelli cellulari.

KLF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KLF6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KLF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KLF6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KLF6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KLF6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KLF6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KLF6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KLF6 nelle cellule tumorali con espressione di KLF6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.