KIR4.2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421234

Descripción general

Kcnj15 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador hacia el interior KIR4.2, una proteína de membrana que contribuye a la conductancia de potasio y ayuda a estabilizar el potencial de membrana en reposo en células excitables y no excitables. Al regular el flujo de K+, KIR4.2 puede influir en el equilibrio osmótico celular, la excitabilidad de la membrana y los procesos de señalización dependientes de iones que se intersectan con vías de transporte y con la homeostasis electrofisiológica. La alteración de la actividad de los canales de potasio es ampliamente relevante para estudios del transporte renal y epitelial, la fisiología neuronal y glial, y redes de señalización sensibles al estrés. La regulación anómala del manejo iónico y del control del potencial de membrana también se ha implicado en mecanismos subyacentes a respuestas inflamatorias y disfunción tisular, lo que convierte a Kcnj15 en un objetivo útil para interrogar vías mecanísticas en sistemas de modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR4.2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kcnj15 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kcnj15 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kcnj15 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR4.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kcnj15 para la investigación de la señalización de KIR4.2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kcnj15 críticos para la función de KIR4.2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kcnj15 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIR4.2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KIR4.2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kcnj15. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR4.2 (m) y el plásmido HDR KIR4.2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kcnj15 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kcnj15 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.