Plásmido Doble Nickase (h) KIR3.4: sc-404643-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)KIR3.4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa KIR3.4 (h) y el plásmido de doble nickasa KIR3.4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KCNJ5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KIR3.4 Anticuerpo (8D2): sc-293378
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) KIR3.4 | sc-404643-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) KIR3.4 | sc-404643-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **KCNJ5** codifica la subunidad del canal de potasio rectificador hacia el interior **KIR3.4 (GIRK4)**, que se ensambla con otros miembros de la familia GIRK para formar canales de K+ activados por proteínas G, los cuales acoplan la señalización de los GPCR con la hiperpolarización de la membrana. Al conducir potasio bajo el control de las subunidades Gβγ, KIR3.4 ayuda a regular la excitabilidad celular, la actividad marcapasos y los cambios del potencial de membrana dependientes del estímulo que modulan la entrada de calcio y la señalización downstream. KCNJ5 está implicado en la regulación de la aldosterona en las células de la zona glomerulosa de la glándula suprarrenal, y variantes recurrentes se han asociado con trastornos de exceso de mineralocorticoides y fenotipos cardiometabólicos relacionados. La alteración de la función de KIR3.4 también es relevante para estudios electrofisiológicos de señalización cardíaca y neuroendocrina, incluida la modulación de vías de GPCR y la homeostasis iónica.
KIR3.4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNJ5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNJ5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNJ5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNJ5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.