Plásmido Doble Nickase (h) KIF3A: sc-403463-NIC

KIF3A codifica el miembro 3A de la familia de quinesinas, una subunidad motora central del complejo quinesina-2 heterotrimérico que impulsa el transporte anterógrado a lo largo de los microtúbulos. KIF3A es esencial para el transporte intraflagelar y el ensamblaje del cilio primario, lo que lo vincula con la transducción de señales de las vías Hedgehog y Wnt, así como con una regulación más amplia de la polaridad celular y la señalización mecanosensorial. A través de sus funciones en el tráfico ciliar y el movimiento de cargas dependiente de microtúbulos, KIF3A influye en programas del desarrollo y en la homeostasis epitelial. La alteración de la función o de la expresión de KIF3A se ha asociado con fenotipos relacionados con ciliopatías y se ha investigado en biología de las vías respiratorias y en otros contextos relevantes para enfermedades en los que la señalización ciliar está perturbada.

KIF3A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KIF3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KIF3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KIF3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KIF3A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.