KIF3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403463

Übersicht

KIF3A kodiert eine Untereinheit des Kinesin-2-Motors, die zusammen mit KIF3B und KAP3 den mikrotubulusbasierten anterograden Transport antreibt, der für den Aufbau des primären Ziliums und den intraflagellären Transport erforderlich ist. Über seine Rolle in der Ziliogenese unterstützt KIF3A ziliumabhängige Signaltransduktionswege, darunter Hedgehog und Wnt, und beeinflusst damit Zellpolarität, Differenzierung und Gewebehomöostase. Eine Störung der KIF3A-Funktion ist mit zilienbezogenen Phänotypen verknüpft und wurde in Kontexten wie Entwicklungsanomalien und Fehlregulation von Signalwegen untersucht. In humanen Zellsystemen wird der Verlust von KIF3A häufig genutzt, um den ziliären Transport, die Rezeptorlokalisation und nachgelagerte transkriptionelle Antworten zu untersuchen.

Das KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIF3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIF3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIF3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIF3A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIF3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIF3A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIF3A-Exone abzielen, die für die KIF3A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIF3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIF3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIF3A HDR-Plasmid (h) und KIF3A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIF3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIF3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.