Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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KIF3A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403463
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KIF3A Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico KIF3A, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KIF3A Antibody (E-5): sc-376680
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KIF3A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403463 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KIF3A codifica una subunità motoria della chinesina-2 che, insieme a KIF3B e KAP3, guida il trasporto anterogrado basato sui microtubuli necessario per l’assemblaggio del ciglio primario e per il trasporto intraflagellare. Attraverso il suo ruolo nella ciliogenesi, KIF3A supporta vie di trasduzione del segnale dipendenti dal ciglio, tra cui Hedgehog e Wnt, influenzando la polarità cellulare, la differenziazione e l’omeostasi tissutale. L’alterazione della funzione di KIF3A è associata a fenotipi legati alle ciglia ed è stata studiata in contesti quali anomalie dello sviluppo e disregolazione della segnalazione. Nei sistemi cellulari umani, la perdita di KIF3A è comunemente utilizzata per indagare il traffico ciliare, la localizzazione dei recettori e le risposte trascrizionali a valle.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF3A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KIF3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KIF3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KIF3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIF3A.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KIF3A per lo studio della segnalazione di KIF3A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KIF3A critici per la funzione di KIF3A
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KIF3A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal KIF3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIF3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KIF3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal KIF3A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIF3A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KIF3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KIF3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.