KIF2A Double Nickaseプラスミド (h): sc-405146-NIC

KIF2Aは、キネシン13ファミリーに属する微小管脱重合因子（microtubule depolymerase）をコードしており、微小管プラス端の動態、紡錘体形成、そして有糸分裂時の染色体分配を制御することで、正確な細胞周期進行を支えます。有糸分裂後（ポストミトーシス）の状況では、微小管アレイを再構築し、細胞骨格の編成を協調させることにより、軸索誘導、神経細胞の移動、シナプス形成に寄与します。機能的な関連性から、KIF2Aは微小管依存的輸送や、有糸分裂チェックポイントに関連するプロセスの中に位置づけられ、ゲノム安定性や細胞極性の形成に影響します。KIF2A活性の異常は神経発達に関わる表現型と関連づけられており、また微小管動態の変化が増殖や異数性に影響することから、がん関連の文脈でも頻繁に研究されています。

KIF2A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KIF2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KIF2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KIF2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KIF2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。