Partículas Lentivirales de Activación (h) KIF20A: sc-403194-LAC

KIF20A (miembro 20A de la familia de las quinesinas; MKLP2) es una proteína motora dependiente de microtúbulos necesaria para la progresión mitótica, con funciones clave en la organización del huso, la segregación cromosómica y la citocinesis. Coordina la dinámica del huso central/cuerpo medio y está vinculada funcionalmente a redes reguladoras del ciclo celular, incluidas la señalización dependiente de Aurora B y la formación del anillo contráctil impulsada por RhoA. La expresión desregulada de KIF20A se ha asociado con fenotipos proliferativos y una fidelidad mitótica alterada en múltiples contextos de cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el estrés de la división celular y la inestabilidad genómica. La modulación experimental de KIF20A permite investigar la salida de la mitosis, el momento de la abscisión y la comunicación cruzada microtúbulos–actina en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral KIF20A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KIF20A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral KIF20A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KIF20A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de KIF20A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KIF20A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.