KIF14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408805-ACT

KIF14は、有糸分裂紡錘体およびミッドボディに局在するキネシンモータータンパク質をコードしており、染色体分配、紡錘体の構築、ならびに細胞質分裂を支えます。微小管依存的な輸送を協調させるとともに、中心紡錘体の制御因子と連携して、適切なアブシジョン（最終切断）と細胞周期の進行を確実にします。KIF14の発現制御の破綻は、増殖性の表現型や染色体不安定性としばしば関連し、有糸分裂の忠実性やゲノム維持を司る経路との関与が示唆されます。そのためKIF14は、キネシン活性の変化が有糸分裂の帰結をどのように変えるのかを理解する目的で、細胞分裂制御、異数性、腫瘍生物学のモデルにおいて一般的に研究されています。

KIF14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIF14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIF14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIF14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIF14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIF14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIF14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIF14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIF14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIF14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。