KIF14 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408805-ACT

KIF14 kodiert ein Kinesin-Motorprotein, das an der mitotischen Spindel und am Midbody lokalisiert ist, wo es die Chromosomentrennung, die Spindelorganisation und die Zytokinese unterstützt. Es koordiniert den mikrotubuli-basierten Transport und interagiert mit Regulatoren der zentralen Spindel, um eine korrekte Abszission und den Fortschritt des Zellzyklus sicherzustellen. Eine fehlregulierte KIF14-Expression ist häufig mit proliferativen Phänotypen und chromosomaler Instabilität assoziiert und wird damit mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die mitotische Genauigkeit und die Genomstabilität steuern. Daher wird KIF14 häufig in Modellen der Kontrolle der Zellteilung, der Aneuploidie und der Tumorbiologie untersucht, um zu verstehen, wie veränderte Kinesin-Aktivität mitotische Ergebnisse beeinflusst.

KIF14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KIF14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KIF14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KIF14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KIF14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KIF14-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KIF14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KIF14-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KIF14-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KIF14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.