Plasmide CRISPR d'Activation (h) KIF13A: sc-403751-ACT

KIF13A code une protéine motrice des microtubules de la famille des kinésines‑3, qui assure le transport dirigé vers l’extrémité plus de vésicules et de complexes protéiques, contribuant ainsi au trafic polarisé et à l’organisation du cytosquelette. L’activité de KIF13A est liée aux processus de transport endosomal et membranaire qui influencent la polarité cellulaire, la dynamique de signalisation et le contrôle spatial de la délivrance des cargaisons. Par son rôle dans le transport intracellulaire, KIF13A peut affecter des voies régissant la distribution des récepteurs membranaires et l’intégrité des jonctions. Une régulation altérée de ces processus a été associée à des phénotypes pertinents pour l’inflammation, la fonction de barrière épithéliale et d’autres contextes où une signalisation dépendante du trafic est déterminante.

KIF13A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KIF13A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KIF13A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KIF13A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KIF13A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KIF13A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KIF13A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KIF13A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KIF13A dans les cellules tumorales présentant une expression de KIF13A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.