Plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 6B (m): sc-421355

Présentation

Krt6b code la kératine 6B, une protéine de filament intermédiaire de type II qui s’associe aux kératines de type I pour former le réseau cytosquelettique des épithéliums stratifiés. La kératine 6B contribue à la résistance mécanique, au remodelage épithélial et aux programmes induits par le stress qui accompagnent la réparation des plaies et les états d’hyperprolifération, en coordination avec les processus de différenciation et d’organisation du cytosquelette. Dans la peau de souris et ses annexes, l’expression de Krt6b est induite lors de lésions et d’inflammation, reliant la dynamique des filaments de kératine à la fonction barrière et à l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation des réseaux de kératine est associée à une fragilité épithéliale et à des phénotypes de kératinisation aberrants, ce qui fait de Krt6b un point d’entrée utile pour étudier les réponses au stress dépendantes des kératines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 6B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Krt6b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Krt6b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Krt6b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Keratin 6B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Krt6b pour l'étude de la signalisation de Keratin 6B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Krt6b essentiels à la fonction de Keratin 6B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Krt6b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Keratin 6B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Keratin 6B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Krt6b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Keratin 6B plasmide HDR (m) et le Keratin 6B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Krt6b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Krt6b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.