KDEL receptor 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430617

Descripción general

Kdelr3 codifica el receptor KDEL 3, un receptor de recuperación residente en el Golgi que reconoce el motivo KDEL en el extremo C-terminal de chaperonas luminales del RE que han escapado y las devuelve desde el Golgi al retículo endoplásmico mediante transporte retrógrado dependiente de COPI. Al mantener la proteostasis del RE y la homeostasis del calcio, KDELR3 influye en la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas, la fidelidad de la vía secretora y la remodelación adaptativa al estrés del compartimento secretor temprano. La alteración de la recuperación mediada por el receptor KDEL puede modificar la maduración de glucoproteínas y la sensibilidad al estrés del RE, procesos que se aprovechan con frecuencia en estudios de neurodegeneración, estrés metabólico y demandas secretoras de células tumorales. En sistemas murinos, Kdelr3 constituye un nodo manejable para analizar cómo el transporte entre RE y Golgi se conecta con las redes de proteostasis y las transiciones de estado celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kdelr3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kdelr3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kdelr3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KDEL receptor 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kdelr3 para la investigación de la señalización de KDEL receptor 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kdelr3 críticos para la función de KDEL receptor 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kdelr3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kdelr3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KDEL receptor 3 (m) y el plásmido HDR KDEL receptor 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kdelr3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kdelr3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.