KDEL receptor 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426263

Descripción general

Kdelr2 codifica el receptor KDEL 2, un receptor de recuperación residente del aparato de Golgi que reconoce motivos tipo KDEL en el extremo C-terminal de proteínas solubles del lumen del retículo endoplásmico (RE) y media su transporte retrógrado desde el Golgi al RE mediante vesículas recubiertas por COPI. Al mantener la proteostasis del RE y la compartimentación adecuada de chaperonas y enzimas de plegamiento, el receptor KDEL 2 sostiene la fidelidad de la vía secretora y limita la señalización de estrés vinculada al control de calidad del RE. Este eje de tráfico se cruza con la regulación de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), la maduración de glicoproteínas y la dinámica de reciclaje Golgi‑RE que influye en la adaptación celular al estrés proteotóxico. La disfunción del transporte RE–Golgi y de la proteostasis se ha asociado con neurodegeneración, disfunción metabólica y la remodelación secretora de células cancerosas, lo que hace de Kdelr2 un nodo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kdelr2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kdelr2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kdelr2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KDEL receptor 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kdelr2 para la investigación de la señalización de KDEL receptor 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kdelr2 críticos para la función de KDEL receptor 2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kdelr2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kdelr2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KDEL receptor 2 (m) y el plásmido HDR KDEL receptor 2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kdelr2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kdelr2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.