Plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD5 (h): sc-409961

Présentation

KCTD5 code une protéine contenant un domaine de tétramérisation de canal potassique, qui agit comme adaptateur dans l’homéostasie des protéines dépendante de l’ubiquitine, souvent en association avec des complexes de ligase E3 basés sur CUL3 afin d’influencer l’ubiquitination des substrats et leur dégradation. Par ces interactions, KCTD5 peut moduler la dynamique des réseaux de signalisation et la protéostasie cellulaire, y compris des processus liés à la fonction neuronale et aux voies de réponse au stress. Une régulation altérée des adaptateurs de la famille KCTD a été associée à une dégradation des protéines dérégulée et à des sorties de signalisation perturbées, des caractéristiques récurrentes en biologie du cancer et dans les troubles neurobiologiques. Ainsi, KCTD5 est étudiée comme un nœud modulateur reliant la machinerie d’ubiquitination au contrôle des voies et au phénotype cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCTD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCTD5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCTD5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KCTD5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCTD5 pour l'étude de la signalisation de KCTD5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCTD5 essentiels à la fonction de KCTD5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCTD5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KCTD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KCTD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCTD5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KCTD5 plasmide HDR (h) et le KCTD5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCTD5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCTD5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.