KCTD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409961

Übersicht

KCTD5 kodiert ein Protein mit einer Kaliumkanal-Tetramerisierungsdomäne, das als Adapter in der ubiquitinabhängigen Protein-Homöostase fungiert und dabei häufig mit CUL3-basierten E3-Ligase-Komplexen zusammenwirkt, um die Ubiquitinierung und den Umsatz von Substraten zu beeinflussen. Über diese Interaktionen kann KCTD5 die Dynamik von Signalkaskaden und die zelluläre Proteostase mitbestimmen, einschließlich Prozessen, die mit neuronaler Funktion und stressresponsiven Signalwegen verknüpft sind. Eine veränderte Regulation von Adaptern der KCTD-Familie wurde mit fehlgesteuerter Proteindegradation und gestörten Signalausgängen in Verbindung gebracht – wiederkehrenden Merkmalen sowohl der Krebsbiologie als auch neurobiologischer Erkrankungen. Entsprechend wird KCTD5 als modulatorischer Knotenpunkt untersucht, der die Ubiquitinierungsmaschinerie mit der Kontrolle von Signalwegen und dem zellulären Phänotyp verbindet.

Das KCTD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCTD5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCTD5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCTD5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCTD5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCTD5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCTD5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCTD5-Exone abzielen, die für die KCTD5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCTD5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCTD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCTD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCTD5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCTD5 HDR-Plasmid (h) und KCTD5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCTD5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCTD5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.