KCTD15 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407663-NIC

KCTD15は、カリウムチャネル四量体化ドメイン（KCTD）ファミリーに属する、BTB/POZドメインを含むアダプタータンパク質をコードしており、タンパク質間相互作用やシグナル伝達ネットワークの制御に関与します。KCTD15は、神経堤の発生や脂肪細胞分化（アディポジェネシス）を司る転写プログラムの調節に関連づけられており、WNT/β-カテニン関連の制御回路や細胞分化状態という文脈でしばしば議論されます。遺伝学的関連解析では、KCTD15座位が肥満関連形質に関与することが示唆されており、代謝調節や神経発生に関係するさまざまな状況でKCTD15発現の変化が報告されています。これらの特性により、KCTD15はヒト細胞モデルにおいて、経路間クロストーク、系譜（ライン）特異化、ならびに遺伝子型から表現型への関係を解明するための有用な標的となります。

KCTD15 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCTD15 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCTD15内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCTD15の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCTD15が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。