Plasmide CRISPR d'Activation (h2) karyopherin α7: sc-418827-ACT-2

Le gène humain KPNA7 code la karyophérine alpha 7, un adaptateur de la famille des importines-α qui reconnaît les signaux classiques de localisation nucléaire et s’associe à l’importine-β pour assurer un transport nucléocytoplasmique sélectif à travers le complexe du pore nucléaire. KPNA7 favorise l’import nucléaire de protéines régulatrices impliquées dans le contrôle transcriptionnel, la progression du cycle cellulaire et les programmes précoces du développement, ce qui la relie plus largement aux voies du transport nucléaire et aux processus associés à la chromatine. Une dérégulation de la signalisation des importines-α et une expression altérée de KPNA7 ont été décrites dans des contextes de prolifération aberrante et de biologie tumorale, suggérant une pertinence pour les mécanismes de localisation nucléaire des facteurs de transcription oncogéniques et de régulation du génome. Les réactifs ciblant KPNA7 sont utiles pour analyser la spécificité des cargaisons, cartographier les réseaux d’import nucléaire et évaluer comment des perturbations du trafic nucléaire influencent l’expression génique et les phénotypes cellulaires dans des systèmes modèles humains.

karyopherin α7 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KPNA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

karyopherin α7 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KPNA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KPNA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de karyopherin α7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KPNA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de karyopherin α7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie karyopherin α7 dans les cellules tumorales présentant une expression de KPNA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.