Plasmide CRISPR d'Activation (h) JunD: sc-400713-ACT

Le gène humain **JUND** code **JunD**, un facteur de transcription à fermeture éclair leucine basique (bZIP) du complexe **AP-1**, qui intègre les signalisations **MAPK/ERK** et **JNK** afin de réguler, selon le contexte, des programmes impliqués dans la prolifération, la différenciation, l’adaptation au stress et l’apoptose. En dimérisant avec des membres des familles **JUN** et **FOS**, JunD se fixe à des éléments de type **TRE/CRE** pour moduler l’expression des gènes de réponse immédiate et des réponses transcriptionnelles associées à la chromatine. JunD participe à l’homéostasie rédox et aux voies sensibles aux cytokines et aux facteurs de croissance, influençant le contrôle du cycle cellulaire et la fonction mitochondriale en situation de stress oxydant. Une activité **AP-1** dérégulée impliquant des facteurs de la famille JUN, dont JunD, est associée à des réseaux transcriptionnels oncogéniques, à la signalisation inflammatoire et à un remodelage aberrant de l’expression génique spécifique des tissus dans le cancer et d’autres maladies complexes.

JunD Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JUND sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JunD Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JUND dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JUND, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JunD. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JUND natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JunD au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JunD dans les cellules tumorales présentant une expression de JUND silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.