JNK1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400048-ACT

MAPK8 kodiert die humane c-Jun-N-terminalen Kinase 1 (JNK1), eine stressaktivierte MAP-Kinase, die Transkriptionsfaktoren wie c-JUN phosphoryliert und AP-1-abhängige Genprogramme moduliert. JNK1 integriert Signale von Zytokinen, oxidativem Stress, UV-Bestrahlung und Stress des endoplasmatischen Retikulums, um über Crosstalk zwischen MAPK- und NF-κB-Signalwegen Apoptose, Autophagie, Entzündung und Zellzykluskontrolle zu regulieren. Dieser Signalweg trägt zu zellulären Entscheidungen bei, die onkogene Transformation, neurodegenerative Prozesse sowie metabolische und inflammatorische Phänotypen beeinflussen, was MAPK8 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die mechanistische Analyse von Signalwegen macht. Eine fehlregulierte JNK1-Signalisierung wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderter Immun-Signalübertragung und Stressantwort-Netzwerken in Verbindung gebracht, was ihren Nutzen in funktionellen Genomikstudien unterstreicht.

JNK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPK8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

JNK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPK8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPK8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen JNK1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPK8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von JNK1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des JNK1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPK8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.