JMJD2B Plasmide Double Nickase (h): sc-405385-NIC

Il gene umano KDM4B (JMJD2B) codifica una demetilasi della lisina degli istoni contenente il dominio Jumonji C (JmjC) che rimuove principalmente i segni repressivi H3K9me3/me2, rimodellando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. Grazie al suo collegamento con il controllo epigenetico della progressione del ciclo cellulare, delle risposte al danno del DNA e dell’espressione genica associata alle linee cellulari, JMJD2B influenza vie che coordinano proliferazione e differenziamento. L’attività e l’espressione deregolate di KDM4B sono state collegate a stati trascrizionali aberranti osservati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la segnalazione oncogenica e reti alterate responsivi agli ormoni o all’ipossia. In quanto regolatore della cromatina, JMJD2B è spesso studiato per definire come le dinamiche di metilazione degli istoni influenzino la regolazione genica e la stabilità del genoma.

JMJD2B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM4B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM4B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM4B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM4B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.