Plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD2A (m): sc-432966

Présentation

Kdm4a code la déméthylase murine des lysines d’histones JMJD2A (KDM4A), une enzyme à domaine JmjC qui enlève des marques de méthylation répressives et activatrices sur H3K9 et H3K36 afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. En couplant l’état épigénétique aux processus dépendants de l’ADN, JMJD2A influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress de réplication et la stabilité du génome, et elle s’interface avec des voies qui régulent la différenciation et la transcription sensible aux hormones. Une activité dérégulée de la famille KDM4 a été associée à une signalisation oncogénique altérée, à des défauts de réparation de l’ADN et à une expression anormale de gènes du développement, faisant de Kdm4a une cible fréquente dans l’étude des mécanismes pathologiques pilotés par la chromatine. Dans les systèmes murins, la perturbation de Kdm4a est souvent utilisée pour analyser comment la dynamique de méthylation des histones coordonne les réseaux transcriptionnels et la plasticité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD2A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kdm4a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kdm4a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kdm4a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JMJD2A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kdm4a pour l'étude de la signalisation de JMJD2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kdm4a essentiels à la fonction de JMJD2A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kdm4a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JMJD2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le JMJD2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kdm4a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JMJD2A plasmide HDR (m) et le JMJD2A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kdm4a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kdm4a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.