Plásmido Doble Nickase (m) JK-1: sc-425927-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)JK-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa JK-1 (m) y el plásmido de doble nickasa JK-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Fam134b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) JK-1 | sc-425927-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) JK-1 | sc-425927-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fam134b (también conocido como JK-1) codifica una proteína de membrana residente en el retículo endoplásmico (RE) que actúa como receptor selectivo de autofagia para la reticulofagia, conectando fragmentos del RE con la maquinaria autofágica mediante interacciones con proteínas de la familia LC3. Al regular el recambio del RE y la proteostasis, FAM134B influye en vías relacionadas con la respuesta a proteínas mal plegadas, la adaptación al estrés del RE y el control de calidad celular ante desafíos metabólicos o proteotóxicos. La alteración de la autofagia del RE (ER-phagy) dependiente de FAM134B puede modificar la homeostasis de los orgánulos y la señalización de estrés, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de neurodegeneración, neuropatía periférica y otros contextos en los que la integridad del RE y el equilibrio de la autofagia afectan la fisiología celular. En sistemas murinos, Fam134b ofrece un punto de entrada manejable para dilucidar cómo la autofagia selectiva del RE se conecta con el manejo de lípidos, la remodelación de membranas y programas transcripcionales sensibles al estrés.
JK-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Fam134b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Fam134b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Fam134b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Fam134b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.