Plasmide Double Nickase (h) JK-1: sc-408238-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) JK-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide JK-1 Double Nickase (h) et le plasmide JK-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAM134B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) JK-1 | sc-408238-NIC | 20 µg | $410.00 |
FAM134B code la protéine humaine JK-1, un membre de la famille des réticulons résidant dans le réticulum endoplasmique (RE) et agissant comme récepteur sélectif d’autophagie dans l’ER-phagie. En reliant les membranes du RE à la machinerie autophagique, JK-1 aide à maintenir la morphologie du RE et la protéostasie en conditions de stress et contribue à l’élimination de sous-domaines aberrants du RE. Cette activité recoupe la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), le contrôle qualité des organites et des voies d’autophagie plus larges qui façonnent l’homéostasie cellulaire. Une altération de la fonction FAM134B/JK-1 a été associée à des phénotypes de neurodégénérescence et de neuropathie sensorielle, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la susceptibilité au stress du RE et du remodelage dépendant de l’autophagie.
JK-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAM134B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAM134B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAM134B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAM134B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.