Plásmido CRISPR de Activación (h) JHDM1D: sc-405142-ACT

KDM7A (también conocido como JHDM1D) codifica una desmetilasa de histonas con dominio Jumonji C que modula la accesibilidad de la cromatina al eliminar marcas metilo represivas en residuos de lisina de la histona H3, configurando así programas transcripcionales. Mediante regulación epigenética, JHDM1D influye en procesos como la especificación del destino celular, la expresión génica asociada al linaje y la coordinación de redes transcripcionales del desarrollo y de respuesta al estrés. La desregulación de la dinámica de metilación de histonas en la que participa KDM7A se ha implicado en estados transcripcionales aberrantes relevantes para la transformación oncogénica y fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control génico impulsado por la cromatina. Su actividad se entrecruza con vías epigenéticas más amplias que acoplan el estado de las modificaciones de histonas con la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II y el mantenimiento de la identidad celular.

JHDM1D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDM7A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JHDM1D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDM7A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDM7A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JHDM1D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDM7A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JHDM1D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JHDM1D en células tumorales con expresión de KDM7A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.