ITI-H4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403358-NIC

La catena pesante 4 dell’inibitore inter-alfa-tripsina (ITIH4) è una glicoproteina secreta arricchita nel fegato che va incontro a processamento proteolitico nel plasma ed è collegata alla stabilizzazione del microambiente extracellulare durante l’infiammazione. In quanto membro della famiglia degli inibitori inter-alfa-tripsina, ITIH4 è associata alle risposte di fase acuta e a processi di rimodellamento regolati da proteasi che intersecano coagulazione, attività del complemento e omeostasi della matrice extracellulare. Alterazioni dell’abbondanza di ITIH4 e dei suoi pattern di frammentazione sono state riportate in stati infiammatori sistemici e in diversi tumori, a supporto del suo impiego come target legato a biomarcatori per studi meccanicistici. L’analisi della funzione di ITIH4 aiuta a chiarire come le reti di proteasi circolanti e la segnalazione infiammatoria plasmino le risposte al danno tissutale e i cambiamenti del microambiente associato al tumore.

ITI-H4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITIH4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITIH4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITIH4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITIH4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.