Plasmide CRISPR/Cas9 KO Islet-1 (m): sc-421157

Présentation

Le gène murin *Isl1* code le facteur de transcription LIM-homeodomaine Islet-1 (ISL1), un régulateur clé de la spécification des lignages et de la différenciation au cours du développement du système nerveux, du pancréas et des tissus cardiovasculaires. ISL1 coordonne des programmes transcriptionnels qui contrôlent le maintien des progéniteurs, les choix de destinée cellulaire et la maturation, en agissant via des interactions dépendantes du contexte avec des cofacteurs liant les domaines LIM et des réseaux de gènes homeobox. Dans la biologie des îlots pancréatiques, *Isl1* soutient l’expression de gènes endocrines et la maturation fonctionnelle, tandis que dans les progéniteurs des motoneurones et du cœur il contribue à la mise en place des structures (patterning) et à la morphogenèse. Une activité d’ISL1 dérégulée est donc pertinente pour des études mécanistiques sur le dysfonctionnement des îlots lié au diabète, le développement cardiaque congénital et les voies neurodéveloppementales dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Islet-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Isl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Isl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Isl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Islet-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Isl1 pour l'étude de la signalisation de Islet-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Isl1 essentiels à la fonction de Islet-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Isl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Islet-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Islet-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Isl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Islet-1 plasmide HDR (m) et le Islet-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Isl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Isl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.