IRX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404632

Übersicht

IRX3 (Iroquois-Homeobox 3) kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der embryonalen Musterbildung und Organogenese zur Etablierung transkriptioneller Programme beiträgt und dabei kontextabhängige Funktionen bei der Festlegung von Zellschicksalen und der Differenzierung übernimmt. In menschlichen Zellen ist IRX3 in entwicklungsbiologische Signalnetzwerke eingebunden, darunter Signalwege mit Bezug zur Wnt- und BMP-Signalgebung, und beeinflusst so Linienentscheidungen sowie die gewebespezifische Genexpression. Über die Entwicklung hinaus wurde eine veränderte Regulation von IRX3 mit metabolischen Phänotypen und Veränderungen der Adipozytenbiologie in Verbindung gebracht; zudem wurde eine dysregulierte IRX3-Expression in mehreren Krebszusammenhängen beschrieben. Diese Eigenschaften machen IRX3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Kontrolle, von Differenzierungszuständen und signalweggetriebener genregulatorischer Schaltkreise.

Das IRX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IRX3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IRX3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IRX3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRX3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IRX3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRX3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IRX3-Exone abzielen, die für die IRX3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IRX3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IRX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IRX3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRX3 HDR-Plasmid (h) und IRX3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IRX3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IRX3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.