Plasmide Double Nickase (h) IRS-2: sc-400474-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IRS-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IRS-2 Double Nickase (h) et le plasmide IRS-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IRS2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IRS-2 Antibody (B-5): sc-390761
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IRS-2 | sc-400474-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IRS-2 | sc-400474-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène Insulin receptor substrate 2 (IRS2) code IRS‑2, une protéine adaptatrice d’ancrage qui transmet les signaux des récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1 vers des effecteurs en aval contrôlant le métabolisme du glucose, l’homéostasie lipidique, la croissance cellulaire et la survie. Après phosphorylation des tyrosines médiée par le récepteur, IRS‑2 recrute des protéines à domaine SH2 telles que la PI3K afin d’activer la signalisation AKT/mTOR, et s’interface avec les voies RAS–MAPK pour réguler des programmes transcriptionnels et métaboliques. L’activité d’IRS‑2 influence la sensibilité à l’insuline, la néoglucogenèse hépatique et la fonction des adipocytes, et des altérations de la signalisation IRS2 ont été associées à des dysfonctionnements métaboliques et à la résistance à l’insuline. Une signalisation dépendante d’IRS‑2 dérégulée est également étudiée dans des contextes de prolifération anormale et de réponses au stress, où le remodelage de la voie PI3K–AKT contribue à des phénotypes liés aux maladies.
IRS-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IRS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IRS2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IRS2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IRS2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.