Plásmido Doble Nickase (m) IRP-2: sc-425717-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)IRP-2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IRP-2 (m) y el plásmido de doble nickasa IRP-2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ireb2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRP-2 Anticuerpo (4G11): sc-33680
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) IRP-2 | sc-425717-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Ireb2 del ratón codifica la proteína reguladora del hierro 2 (IRP-2), un factor de unión a ARN que controla de forma posranscripcional la homeostasis del hierro al reconocer elementos sensibles al hierro en ARNm diana como los del receptor de transferrina 1 y la ferritina. Mediante la regulación, dependiente de hierro y oxígeno, de la estabilidad de IRP-2, Ireb2 integra la disponibilidad celular de hierro con vías que gobiernan el metabolismo mitocondrial, el equilibrio redox y la biogénesis del hemo y de los clústeres hierro‑azufre. La alteración de la actividad de IRP-2 puede modificar los reservorios de hierro lábil y las respuestas al estrés oxidativo, vinculando la dishomeostasis del hierro con la neurodegeneración, fenotipos relacionados con la anemia y la señalización inflamatoria en múltiples tejidos. Estas propiedades hacen de Ireb2 un locus útil para estudios mecanísticos de la regulación génica dependiente de hierro, la susceptibilidad a la ferroptosis y la adaptación metabólica en modelos murinos y células cultivadas.
IRP-2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ireb2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ireb2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ireb2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ireb2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.