IRP-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-425717-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IRP-2O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase IRP-2 (m) e o Plasmídeo Double Nickase IRP-2 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ireb2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IRP-2 Anticorpo (4G11): sc-33680
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IRP-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-425717-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Ireb2 de camundongo codifica a proteína reguladora de ferro 2 (IRP-2), um fator de ligação a RNA que controla pós-transcricionalmente a homeostase do ferro ao reconhecer elementos responsivos ao ferro em mRNAs-alvo, como o receptor de transferrina 1 e a ferritina. Por meio da regulação da estabilidade da IRP-2 dependente de ferro e oxigênio, o Ireb2 integra a disponibilidade celular de ferro a vias que governam o metabolismo mitocondrial, o equilíbrio redox e a biogênese de heme e de clusters ferro–enxofre. A perturbação da atividade da IRP-2 pode alterar os pools de ferro lábil e as respostas ao estresse oxidativo, vinculando a desregulação da homeostase do ferro à neurodegeneração, a fenótipos relacionados à anemia e à sinalização inflamatória em múltiplos tecidos. Essas propriedades fazem do Ireb2 um locus útil para estudos mecanísticos de regulação gênica dependente de ferro, suscetibilidade à ferroptose e adaptação metabólica em modelos murinos e em células cultivadas.
IRP-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ireb2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ireb2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ireb2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ireb2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.