Plásmido Doble Nickase (m) IRF3: sc-424792-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)IRF3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IRF3 (m) y el plásmido de doble nickasa IRF3 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Irf3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRF3 Anticuerpo (D-3): sc-376455
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) IRF3 | sc-424792-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Irf3 de ratón codifica el factor regulador de interferón 3 (IRF3), un factor de transcripción central en la inmunidad antiviral innata que conecta la detección de ácidos nucleicos citosólicos con la expresión de interferón de tipo I y de genes estimulados por interferón. Tras su activación aguas abajo de vías de PRR, incluidas cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS y TLR3–TRIF, IRF3 es fosforilado por TBK1/IKKε, dimeriza y se transloca al núcleo para coordinar programas transcripcionales inflamatorios y antivirales. La señalización de IRF3 se entrecruza con NF-κB e IRF7 para modular la producción de citocinas, la apoptosis y la remodelación inmunometabólica durante la infección y la inflamación estéril. La actividad desregulada de IRF3 se ha implicado en la susceptibilidad a infecciones virales, respuestas de interferón aberrantes y patologías inflamatorias, lo que convierte a Irf3 en un nodo clave para estudios mecanísticos de la señalización inmunitaria innata.
IRF3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Irf3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Irf3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Irf3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Irf3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.