IRF-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421148-ACT

O gene Irf4 de camundongo codifica o IRF-4, um fator de transcrição enriquecido em linfócitos que coordena programas gênicos que controlam a diferenciação, a ativação e a função efetora de células imunes. O IRF-4 integra sinais a jusante do engajamento do receptor de antígeno e de estímulos por citocinas para regular redes transcricionais envolvidas na maturação de células B, no desenvolvimento de plasmócitos, na dinâmica dos centros germinativos e na polarização de células T. Por meio de interações com parceiros como PU.1/SPI1, fatores da família BATF e vias associadas ao NF-κB, o IRF-4 ajuda a modular a acessibilidade da cromatina e o uso de enhancers específicos de linhagem. A atividade desregulada do IRF-4 está associada a respostas imunes aberrantes e a mecanismos de doenças inflamatórias, tornando o Irf4 um nó-chave para estudar sinalização imune e controle transcricional em modelos murinos.

IRF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Irf4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Irf4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Irf4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Irf4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-4 em células tumorais com expressão de Irf4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.