Plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (h): sc-400986

Présentation

ITPR1 code le récepteur de l’inositol 1,4,5‑trisphosphate de type 1 (IP3R‑I), un canal de libération de Ca²⁺ du réticulum endoplasmique qui convertit les signaux IP₃ en aval de récepteurs couplés à la PLC en transitoires de calcium cytosolique et mitochondrial. Les flux de Ca²⁺ médiés par IP3R‑I régulent le couplage excitation–transcription, la plasticité synaptique, la sécrétion et l’apoptose, et s’intègrent à des voies telles que la signalisation GPCR/RTK–PLCβ/γ–IP₃, la calmoduline/CaMK, la calcineurine–NFAT, ainsi que la communication au niveau des sites de contact RE–mitochondries. L’activité d’ITPR1 module l’homéostasie du calcium et les réponses au stress, influençant des phénotypes cellulaires incluant l’activité de décharge neuronale, l’autophagie et la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées. Des variations génétiques ou une dérégulation d’ITPR1 ont été associées à des dysfonctionnements neurologiques, notamment à des phénotypes d’ataxie spinocérébelleuse, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation calcique dans des cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITPR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITPR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITPR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IP3R-I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITPR1 pour l'étude de la signalisation de IP3R-I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ITPR1 essentiels à la fonction de IP3R-I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITPR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IP3R-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IP3R-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITPR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IP3R-I plasmide HDR (h) et le IP3R-I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITPR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITPR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.