IP3KA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404638
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IP3KA El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IP3KA, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IP3KA Anticuerpo (F-3): sc-271838
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IP3KA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404638 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ITPKA codifica la inositol-trifosfato 3-quinasa A (IP3KA), una enzima enriquecida en neuronas que fosforila el inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) para generar IP4, remodelando así la dinámica de la señalización intracelular de Ca2+. Al modular la liberación de calcio dependiente de IP3 desde el retículo endoplásmico, IP3KA influye en la actividad sináptica, la remodelación de las espinas dendríticas y la transducción de señales dependiente de la actividad. Esta vía se entrecruza con el metabolismo de los fosfoinosítidos y con redes de quinasas reguladas por calcio que coordinan la organización del citoesqueleto y las respuestas transcripcionales. La desregulación de la señalización IP3KA/IP3 se ha implicado en alteraciones de la plasticidad neuronal y en otros fenotipos de señalización relevantes para la neurobiología y la remodelación de vías asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ITPKA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ITPKA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ITPKA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IP3KA.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ITPKA para la investigación de la señalización de IP3KA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ITPKA críticos para la función de IP3KA
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ITPKA para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IP3KA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido IP3KA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ITPKA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IP3KA (h) y el plásmido HDR IP3KA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ITPKA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ITPKA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.