Plasmide Double Nickase (h) Integrin αE/ITGAE/CD103: sc-404333-NIC

ITGAE code pour l’intégrine αE (CD103), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β7 pour former le récepteur d’adhérence αEβ7, lequel se lie à l’E-cadhérine et favorise la rétention des lymphocytes au sein des tissus épithéliaux. Ce récepteur participe à la signalisation « outside-in » des intégrines, qui coordonne le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et la dynamique de la synapse immunologique, en s’articulant avec des voies impliquant les kinases d’adhérence focale ainsi que les voies MAPK et PI3K en aval. CD103 est un marqueur caractéristique des lymphocytes T mémoire résidents des tissus et de certains sous-ensembles de cellules dendritiques, contribuant à la surveillance immunitaire des muqueuses et aux interactions avec la barrière épithéliale. Les altérations de l’expression d’ITGAE et les infiltrats immunitaires CD103-positifs sont largement étudiés dans des contextes d’inflammation chronique et dans les microenvironnements tumoraux, où ils éclairent les mécanismes de localisation et de fonction des cellules immunitaires.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGAE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGAE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGAE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGAE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.